出國(guó)治療 慢病毒用作基因治療后的感染問(wèn)題

臨床發(fā)現(xiàn)，scFv產(chǎn)生的腫瘤靶向作用，與抗原-抗體的相互作用類似，結(jié)合結(jié)構(gòu)域的親和力，抗原表位結(jié)構(gòu)，以及在腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的抗原量等因素，可影響基因修飾細(xì)胞對(duì)靶抗原的應(yīng)答反應(yīng)。出國(guó)治療服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康介紹到，近，一些藥物如抗生物素蛋白被設(shè)計(jì)到CAR的N末端，用來(lái)識(shí)別結(jié)合在單克隆抗體、核酸適配體或配體上的可溶性生物素耙點(diǎn)。

TCR基因修飾T細(xì)胞，需要將腫瘤抗原特異性TCR導(dǎo)入T細(xì)胞基因組，并使其穩(wěn)定表達(dá)。反轉(zhuǎn)錄病毒載體，是第一個(gè)被允許用于臨床的基因載體，其優(yōu)點(diǎn)是在轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)能夠保持病毒載體基因組，和插入基因的長(zhǎng)期穩(wěn)定整合。但反轉(zhuǎn)錄病毒整合過(guò)程中可能發(fā)生插入突變，從而引起惡變，且容納外源DNA片段較短，病毒滴度低。出國(guó)治療后，腺病毒載體是一種線性雙鏈DNA，無(wú)包膜病毒，具有廣宿主性，可感染分裂和非分裂終末細(xì)胞。

與反轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，外源基因的容納量大，滴度高，其DNA不會(huì)整合到靶細(xì)胞DNA中，潛在的致癌危險(xiǎn)小。但表達(dá)時(shí)間短暫，出國(guó)治療過(guò)程中需反復(fù)操作，慢病毒載體既可以轉(zhuǎn)染處于有絲分裂活躍期的細(xì)胞，又可以轉(zhuǎn)染分裂緩慢及處于分裂終末期的細(xì)胞，具有轉(zhuǎn)移基因片段容量較大，目的基因表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)，不易誘發(fā)免疫反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。

出國(guó)治療服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康介紹到，慢病毒用作基因治療載體，仍有如毒力恢復(fù)、垂直感染等安全問(wèn)題。雖然有各種類型的病毒載體，但這些載體的使用一直是臨床治療需要考慮的問(wèn)題。因此，開(kāi)發(fā)新的具有優(yōu)越轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的非病毒方法，是非常有必要的。

近年來(lái)，一種新RNA電穿孔技術(shù)，在TCR基因轉(zhuǎn)導(dǎo)上取得了很好的效果，有可能成為新的發(fā)展方向。一般來(lái)說(shuō)，CAR-T細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，包括白細(xì)胞采集，從病人的血液中分離CD4+和CD8+T細(xì)胞。出國(guó)治療T細(xì)胞活化，使用0KT3、IL-2或照射的外周血單個(gè)核細(xì)胞，作為抗原提呈細(xì)胞來(lái)活化T細(xì)胞。另一個(gè)更有效的方法是，用抗體包被的磁珠作為人工樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs），轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染，體外將編碼抗靶基因的嵌合抗原受體的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染人T細(xì)胞。目前慢病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒載體，和睡美人轉(zhuǎn)座系統(tǒng)已被用于基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，而反轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒載體，由于基因轉(zhuǎn)染效率高成為常用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，基因治療的基因轉(zhuǎn)移方法。

出國(guó)治療擴(kuò)增基因修飾的細(xì)胞，可以通過(guò)生物反應(yīng)器系統(tǒng)如WAVE生物反應(yīng)器（GE公司學(xué)，皮斯卡塔韋，新澤西州，美國(guó)）和G-rex生物反應(yīng)器（威爾遜，新布萊頓，MN，USA）來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步的體外擴(kuò)增。這兩個(gè)生物反應(yīng)器培養(yǎng)系統(tǒng)，已被證明具有拓展商業(yè)化的細(xì)胞療法的能力。化療在T細(xì)胞輸注前病人，接受一種淋巴細(xì)胞刪除方案。輸注將基因工程修飾T細(xì)胞回輸給病人。