國外看病 活體切片檢查受不同細胞類型干擾

丹娜法伯癌癥研究院成立于1947年，一直致力于為癌癥患者提供專業(yè)的、好的醫(yī)療服務(wù)，同時通過前沿尖端研究提高對癌癥及相關(guān)疾病的認(rèn)識、診斷、治療及預(yù)防等。它是美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的癌癥專科附屬醫(yī)院。

國外看病服務(wù)機構(gòu)愛諾美康介紹到，丹娜法伯頭頸癌中心是全美經(jīng)驗豐富頭頸癌治療中心之一，致力于診斷和治療各種頭頸部癌癥，包括罕見的，類型復(fù)雜的癌癥。中心醫(yī)療團隊每年收治大量的各種類型的頭頸部癌癥患者，甚至有些亞型在其他一些癌癥中心每年僅能看到幾例。中心主任Robert I. Haddad，為美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院副教授，在頭頸癌治療方面造詣頗深，被評為美國2011年優(yōu)秀腫瘤醫(yī)生，尤其擅長局部晚期和轉(zhuǎn)移性頭頸部癌癥的治療，且主導(dǎo)進行多項相關(guān)臨床試驗研究。

蛋白質(zhì)組學(xué)研究的發(fā)展，不但提供了新的臨床診斷技術(shù)與疾病治療靶點，也進一步加深了對生物過程等基礎(chǔ)研究的全面認(rèn)識。隨著當(dāng)前科學(xué)技術(shù)與研究工具的不斷成熟與優(yōu)化，新的蛋白質(zhì)組學(xué)研究平臺將極大地推動生命與疾病進程的研究。

為了保證蛋白質(zhì)組分析所需樣品的高品質(zhì)性，保證起始樣品的純度是非常有必要的。對組織來源的樣品更要謹(jǐn)慎，需對其進行選擇性分離以排除異質(zhì)性區(qū)域或其他組織、細胞系或疾病導(dǎo)致的樣品污染。患者國外看病，活體組織切片檢查通常受不同細胞類型的干擾，尤其是疾病狀態(tài)中，少部分異常細胞通常與周圍大量的健康組織非常鄰近。當(dāng)前用于樣品制備的技術(shù)主要包括亞細胞器分離、選擇性組織顯微切割及激光捕獲顯微切割。

激光捕獲顯微切割技術(shù)，是在顯微鏡下將已鑒定的靶組織細胞，黏附到激光激活的熱塑膜上，以完成對組織樣品的選擇性切割。該技術(shù)能夠避免不符合要求的組織或細胞與熱塑膜的黏附，很大程度上提高了組織切割的特異性其缺點是易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，使得終純化所得蛋白樣品數(shù)量減少。與細針顯微切割技術(shù)相比，激光顯微切割定位更準(zhǔn)確、操作更簡便，尤其適用于染色體分析或雜合性丟失等遺傳研究。

國外看病機構(gòu)愛諾美康介紹到，亞細胞器的分離需要對細胞進行機械的和化學(xué)的干擾，以獲得大量結(jié)構(gòu)完整的特定組分。通常的操作是先利用超速離心裂解細胞，再通過差速離心及密度梯度離心，將不同的亞細胞器彼此分離。這一操作可以維持目標(biāo)蛋白的天然構(gòu)象。然而這是一種實驗密集型的技術(shù)，需要較大的樣本量，通常是無法實現(xiàn)的，尤其是在臨床檢測中利用偶聯(lián)質(zhì)譜（MS)直接分析組織切片的技術(shù)，即原位蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)（in situproteomics)將該領(lǐng)域的研究向前推進了一步。該方法保留了蛋白質(zhì)原始的空間分布，便于在保留病理結(jié)構(gòu)信息的條件下比較特定的分子和蛋白之間的差異。

不同的組分被冷凍并固定在基質(zhì)輔助的激光解吸/電離-飛行時間(MALDI-TOF)檢測板上。含有水/乙腈/三氟乙酸的基質(zhì)溶液覆蓋在組織表面連同共結(jié)晶的蛋白質(zhì)產(chǎn)生均勻的晶體場。通過對樣品進行隨機的數(shù)據(jù)采集以獲得初級檢驗的掃描圖譜，該圖譜包括每一個特殊分子在組織特定點的“分子圖像”。分離樣品期間除防止組織或細胞被污染外，還需避免蛋白質(zhì)降解，維持蛋白翻譯后的修飾狀態(tài)及防止蛋白質(zhì)在樣品中溶解。根據(jù)蛋白質(zhì)在質(zhì)譜中的質(zhì)量位移即可鑒定蛋白質(zhì)的甲基化、乙?；土姿峄揎?。

然而，利用質(zhì)量位移卻難以鑒定蛋白質(zhì)的糖基化修飾。糖基化修飾的質(zhì)量位移通常大于幾百道爾頓，且不同的糖基?；祀s在一起。國外看病服務(wù)機構(gòu)愛諾美康介紹到，常見的是乙酰半乳糖胺和乙酰葡萄糖胺，它們可使蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量增加。通過特殊的緩沖液、特定的條件及處理方式可以優(yōu)化大部分問題的解決方案，但一定要保證分離后的蛋白質(zhì)具有與其在體內(nèi)一致的天然構(gòu)象。