安德森癌癥中心 檢測染色體可評估克隆演變

經(jīng)臨床研究分析，細胞遺傳學反應的確定依據(jù)，來自核塑分析Ph+分 裂中期細胞的百分比，至少應該檢測20個中期細胞，其靈敏度為5%，并且可檢測附加細胞遺傳學異常。安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診后獲得CCyR后，間期FISH在CML監(jiān)測中的作用一直存在爭議。

反對常規(guī)使用FISH作為CML監(jiān)測的主要原因，是其與大型臨床試驗的其他結(jié)果缺乏相關性，然而，一些研究表明PB樣本中FISH，檢測BCR-ABL1融合基因與細胞遺傳學反應相關，敏感性更高（靈敏度為0.5%），可檢測隱匿性易位。在不能獲得13M中期細胞時特別有用，安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ISH技術的缺點是不能檢測除t（9；22）以外的細胞遺傳學異常。因此，仍需定期進行染色體核型分析，來評估是否有克隆演變。

在接受TKr冶療的CML患者中，盡管細胞遺傳學反應，常用于指導臨床決策，但利用定量RT-PCR的分子檢測，仍是檢測和定量低水平疾病負荷的“金標準”，是獲得CCyfl及異基因造血干細胞移棺后，重要的監(jiān)測指標。據(jù)安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診報道，主要（MMR）和完全（CMR）分子反應與持續(xù)的細胞遺傳學反應相關，分子反應的確定是依據(jù)BCR-ABL1融合轉(zhuǎn)錄本的水平，與內(nèi)參（通常為ABL1、BCR、GUSB）轉(zhuǎn)錄本水平的比值。

定量RT-PCR的靈敏度為1/105，并且可以采用Taqman或焚光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）技術進行檢測。安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診后，明顯的實驗室間和實驗室內(nèi)，差異取決于樣本類型、RNA的質(zhì)量、RT和PCR的效率及內(nèi)參基因。盡管BM和PB樣本均可用于檢測，但在檢測過程中，應該使用相同的標本類型進行比較。

經(jīng)過努力已經(jīng)建立了一個通用的國際標準，以便于實驗室間進行比較，并且已經(jīng)建立了定量BCR-AJBL1融合基因。安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診機構(gòu)愛諾美康介紹到，第一個WHO國際基因參考模板，將凍干的K562細胞采用HL60細胞稀釋4個不同的濃度，每個濃度根據(jù)國際標準保持BCR-ABL1與內(nèi)參基因的比值不變。國際標準的基線值通過TRIS試驗獲得，其值為100%，降低3個對數(shù)級（即MMR）為0.1%。

采用ABL1基因，作為內(nèi)參存在一些問題，因為有些用于擴增ABL1轉(zhuǎn)錄本的引物，也能擴增BCR-ABL1融合基因上的ABL1基因。因此，安德森癌癥中心轉(zhuǎn)診患者，融合基因的水平可能被低估了，然而，在監(jiān)測過程中，腫瘤負荷明顯降低的情況下，影響則不大。