去美國看病 普通實體腫瘤是異質(zhì)性組織

臨床研究上，位點特異的DNA測序，是以PCR為基礎(chǔ)的方法，這在大多數(shù)的分子診斷實驗室，經(jīng)常用來檢測許多已知的基因突變。例如，在結(jié)直腸癌、肺癌、黑色素瘤、膠質(zhì)母細胞瘤中的癌基因KRAS、BRAF或EGFR中頻繁或熱點突變。去美國看病后，基因或位點特異的外顯子片段，可以通過PCR擴增和DNA測序方法進行。

雙脫氧鏈終止DNA測序（也稱為Sanger測序），是傳統(tǒng)的測序方法，而且也是近常用的測序方法。然而，在豐富的野生型的DNA序列為背景的情況下，它可能無法檢測到少數(shù)的突變序列。去美國看病服務(wù)機構(gòu)愛諾美康介紹，實體腫瘤是異質(zhì)性的組織，該組織中包含有腫瘤細胞和非腫瘤細胞，包括炎性細胞、血管內(nèi)皮細胞和間質(zhì)細胞。

檢測癌基因獲得功能突變，對我們來說是一個特別挑戰(zhàn)，如KRAS。不僅在腫瘤組織中，每個非腫瘤有兩個野生型的等位基因，而且每個腫瘤細胞可能也有它自己的一個副本野生型等位基因。去美國看病后，大規(guī)模并行測序，即我們所知的“焦磷酸測序”，可作為Sanger測序的一種新的替代方法。

這種方法需要將“DNA文庫”，進行基于PCR的微乳滴克隆擴增，以適應(yīng)光纖載板（picotiter plate）中每個克隆擴增模板的微米大小，珠子和后續(xù)焦磷酸的邊合成邊測序。去美國看病采用這種焦磷酸測序方法，可以檢測含腫瘤組織較少的復(fù)雜樣本，及低豐度的基因突變。這是傳統(tǒng)的Sanger測序無法檢測的，高度平行測序的方法，使檢測腫瘤的分子組成和亞型進化過程成為可能。即使是在腫瘤含M較低或不純的病例中，可以采用使細胞含量豐富的方法。

去美國看病服務(wù)機構(gòu)愛諾美康介紹，焦磷酸測序主要是一種克服傳統(tǒng)測序局限性的技術(shù)，它是實時的、非電泳、堿基延伸測序的各種應(yīng)用。在焦磷酸測序中，只有當(dāng)分配核苷酸退火模板，和DNA聚合酶延伸引物時，焦磷酸鹽才形成。隨后，焦磷酸轉(zhuǎn)換為熒光發(fā)射，其強度與退火和延伸的核苷酸分子的數(shù)成正比。焦磷酸測序法在檢測單核苻酸多態(tài)性時，可以非常準(zhǔn)確地M化各等位基因的相對量。