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出國治療 如何評估芯片完整性及樣品質量

發布日期:2018-02-26

臨床研究上證明,基因芯片由成千上萬個DNA探針,以預知的模式固定在基片上,或固定在磁珠上而隨機分布在芯片上。基因表達陣列可檢測熒光標記的cDNA片段,而比較基因組雜交陣列(aCGH),可檢測熒光標記的基因組DNA片段。出國治療后,由于基因芯片檢測平臺的復雜性和多變性,必須在臨床實驗室使用之前和使用中驗證其性能。

任何基因芯片平臺的重復性,應在臨床使用之前得到驗證,而且重復性驗證通常由不同技術人員在不同吋間完成。比如,如果一種RNA表達模式,用于對患者分層成不同的預后群,即使在不同時間進行分析,相同的樣品應該分到同樣的群組里。出國治療用一個基因芯片,檢測大M基因的表達水平,或鑒定基因拷貝數的改變時,在不同的批次檢測中應當獲得相同的表達水平,或基因拷貝數的改變。

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出國治療服務機構愛諾美康介紹到,當驗證一個基因芯片檢測平臺的檢測性能準確性時,由于探針設計、用于標化的管家基因的選擇、標化技術等各方面存在的差異,利用其他表達芯片或qPCR進行驗證可能會得到不一樣的結果。當驗證小片段缺失或是較好的性能的FISH探針時,即使利用作為“金標準”的FLSH驗證,比較基因組雜交陣列(aCGH)平臺的準確性,也可能得到不一樣的結果。

當為基因芯片平臺設計準確性研究時,還需確認所用的兩種技術或平臺的標準化手段,或檢測敏感性是相當的。在進行表達分析之前,應先檢測所用RNA樣品的質量。出國治療對于表達芯片,通常是利用RNA完整性值(RIN),來評估樣品中RNA的質量。高RIN樣品中比RIN低的樣品,通常含有更完整的RNA。

開展基于cDNA合成時結合,在poly-A的轉錄本的芯片分析實驗時,樣品中的RIN數量對于檢測的成功至關重要。出國治療后發現,然而也有些基因芯片平臺,設計成了可以精確 定量已降解的轉錄子,所以樣品中的RIN,對樣本性能的影響微乎其微。