去美國看病 聚合反應(yīng)會標(biāo)記不同等位基因

隨著熒光技術(shù)的迅速發(fā)展，更大通量和更精確的奕光標(biāo)記核酸，進(jìn)行PCR已經(jīng)出現(xiàn)。寡核苷酸探針由在末端的報(bào)告染料標(biāo)記，和末端的非熒光淬滅劑標(biāo)記，在探針完整的情況下，淬滅劑能抑制報(bào)告染料的熒光。

去美國看病服務(wù)機(jī)構(gòu)愛諾美康介紹到，在PCR期間，探針退火到其特定互補(bǔ)序列。裂解酶釋放報(bào)告染料，從而導(dǎo)致每個PCR循環(huán)熒光量增加，并且只有探針與互補(bǔ)序列結(jié)合時(shí)才能釋放熒光。對于雙等位基因系統(tǒng)的等位基因分析，不同等位基因配有不同熒光標(biāo)記的探針（如FAM、VIC），并都被添加進(jìn)PCR反應(yīng)循環(huán)中。

低熒光量說明探針與目的片段結(jié)合效率低下，或者發(fā)生錯配。去美國看病后，只有雜合子才能觀察到高亮度熒光，因此帶標(biāo)記的探針被設(shè)計(jì)為聚合反應(yīng)，正向引物與特定的SNP等位基因雜交，并用不同顏色的熒光基團(tuán)，標(biāo)記不同的等位基因。

因此，去美國看病的擴(kuò)增期間，不管出現(xiàn)一種熒光還是兩種熒光，特定SNP的基因型都能被輕松地確定。因此，TaqMan分析是一個單獨(dú)的復(fù)雜反應(yīng)，也稱為一個SNP反應(yīng)。雖然它每個反應(yīng)可以用多種顏色區(qū)分三或四重SNP，已被廣泛用于GWAS后SNP的驗(yàn)證。進(jìn)行TaqMan分析，識別出4個SNP與前列腺癌的惡性相關(guān)。

去美國看病服務(wù)機(jī)構(gòu)愛諾美康介紹到，中高通量基因分型技術(shù)，是將探針與緊鄰SNP核苷酸序列上游的堿基雜交，隨后進(jìn)行一個迷你測序，其中DNA聚合酶通過在SNP位點(diǎn)，添加單核苷酸來延伸雜交引物。引物延伸產(chǎn)物分析方法有許多種，大多數(shù)是檢測起始試劑，和引物延伸產(chǎn)物之間物理性質(zhì)的差別。去美國看病后，引物延伸分析可以用通用引物檢測，各個特異引物分別檢測每個等位基因。

現(xiàn)在，主要是用前一種方法，比如通用引物（CPE）反應(yīng)，其中一個引物與鄰近SNP位點(diǎn)的末端結(jié)合而退火，并在DNA聚合酶作用下延伸。去美國看病后延伸的核苷酸的性狀，通過熒光或質(zhì)量來確定，以此進(jìn)行SNP的基因分型。