海外醫(yī)療 自動化測序對酶切反應如何進行

據(jù)悉，海外醫(yī)療對乳腺癌和宮頸癌患者的樣本進行基因測序，測序結果與直接測序的結果100%吻合，從而證明T-ARMS-PCR能很好地用于檢出多種SNP。對基于PCR的基因測序方法的改進，包括以嵌合引物為基礎的多重PCR，這一技術在序列特異性引物上，增加了通用的標記，以用于識別一個反應中的多個產(chǎn)物，從而提高PCR的通量和效率。然而，對大通量SNP分型技術的改進因，受限于凝膠電泳分離這一步驟而無法實現(xiàn)。

侵入性分析（Invader Assay）用熱穩(wěn)定瓣狀核酸內(nèi)切酶（FEN），其是從古生菌中提取的酶，能特異識別錯配堿基，因此可以非常靈敏地檢測SNP。海外醫(yī)療上，這一技術用寡核苷酸探針雜交到，含有多態(tài)位點的目的DNA片段，包括等位基因特異引物探針和In-vader探針。與目標序列多態(tài)位點互補但末端不匹配，從而產(chǎn)生覆蓋SNP的核苷酸。

海外醫(yī)療服務機構愛諾美康介紹到，等位基因特異探針與SNP序列互補，一直延伸至多態(tài)位點末端。一旦兩個核苷酸被退火到目的DNA，—個三維結構便在SNP位點上，形成并且能夠由切割酶（FEN）識別，F(xiàn)EN切去探針的與SNP互補的末端。

如果探針被設計成熒光共振能量轉移（FRET）分子，并在末端含有內(nèi)部淬滅劑，那么酶切反應將熒光基團和淬滅劑分離，并產(chǎn)生熒光信號。海外醫(yī)療服務借助于數(shù)據(jù)分析工具，可以進行高效的自動化測序。如果探針與SNP等位基因不匹配，那么便不能產(chǎn)生FEN可識別的三維結構，從而酶切反應無法進行。

這一信號放大技術也能用來量化靶基因，如PCR產(chǎn)物、基因組DNA以及對mRNA表達進行監(jiān)測分析。這一海外醫(yī)療技術，減少了溫育時間（3~4小時）以及測序所需基因組DNA的量。雙向SISAR與Invader分析的初期反應類似，但后會產(chǎn)生兩個SNP等位基因各自的熒光信號。

雖然這些技術允許高度特異性的SNP基因分型，但它需要大量靶分子以產(chǎn)生可探測的熒光信號，并且需要對目標序列進行連續(xù)PCR擴增。此外，海外醫(yī)療的該測定，需要標記有熒光團和淬滅基團的等位探針。因此，試驗被認為過于昂貴，不適合用于大規(guī)模基因分型。