丹娜法伯癌癥研究院 差異分析可鑒定未知基因

一項實驗數(shù)據(jù)表明，cDNA文庫構(gòu)建是反轉(zhuǎn)錄酶的一個重要應(yīng)用方面。通常情況下，研究人員并不關(guān)注包括內(nèi)含子、啟動子和“無信息’DNA序列，及基因組上所有DNA序列。丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診機構(gòu)愛諾美康介紹，根據(jù)研究方向的需要，研究人員往往集中在對特定組織，或細胞中mRNA表達的研究。

由于RNA單鏈的特點，決定無法將其直接連接到克隆載體上，cDNA文庫構(gòu)建技術(shù)應(yīng)運而生。丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診領(lǐng)域獲悉，以特定組織或細胞的mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌。

丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診機構(gòu)愛諾美康了解到，對于每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA，克隆組成cDNA文庫。然后采用放射性標(biāo)記的核酸探針，通過核酸雜交對cDNA文庫進行鑒定。丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診機構(gòu)介紹，如果構(gòu)建cDNA文庫的克隆載體，能夠在宿主菌中啟動轉(zhuǎn)錄，那轉(zhuǎn)錄出的mRNA即可翻譯成其編碼的蛋白質(zhì)。

這種文庫稱為cDiNA表達文庫，表達文庫常用的是克隆載體。丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診機構(gòu)獲悉，在文庫中每一克隆都含有一個特異mRNA編碼的蛋白質(zhì)，如果有合適的蛋白抗體，即可通過抗體雜交對此蛋白進行鑒定。cDNA文庫的用途見于多個方面。

如用于克隆已知基因的cDNA，能測定其mRNA序列，通過測序獲得的cDNA文庫中的許多表達序列標(biāo)簽，能組成表達序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫。丹娜法伯癌癥研究院轉(zhuǎn)診機構(gòu)愛諾美康了解到，而用于未知基因的鑒定，可通過差異篩選分析，鑒定在特定的分化或激活狀態(tài)下，差異表達的基因。