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美國醫院排名 介紹重組蛋白的表達及純化過程

發布日期:2018-10-04

大規模蛋白質相互作用的方法,包括蛋白芯片、酵母雙雜、Pull-down實驗等方法。美國醫院排名詳詢愛諾美康,Pull-down實驗是將免疫共沉淀,和質譜分析相結合的,檢測蛋白相互作用的方法;蛋白芯片技術,是與DNA和RNA芯片檢測方法類似的技術。

美國醫院排名詳詢愛諾美康,其基本原理是將各種蛋白質,有序地固定于各種載體上,成為檢測用的芯片,然后經過標記、結合、信號收集、分析等過程,研究蛋白質與蛋白質之間相互作用的關系、并達到測定各種蛋白質功能的目的。

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經典的酵母雙雜交系統,是在酵母細胞中進行的。美國醫院排名詳詢愛諾美康,利用酵母生長轉錄因子Gal4,及兩個不同的結構域:DNA結合結構域(DNA binding domain)和轉錄激活結構域(trans-activator domain),分別與目標蛋白X,及可能與目標蛋白相互作用的蛋白Y相連。

然后共同轉入酵母細胞中,如果蛋白X與Y能夠發生相互作用,就能使轉錄因子原來分開的兩部分結合,形成完整的活性形式,從而激活下游報告基因。美國醫院排名詳詢愛諾美康,通過檢測報告基因的表達,相關產物就可判斷兩種蛋白,是否發生相互作用。

美國醫院排名詳詢愛諾美康,酵母雙雜交實驗,可以在多個水平上進行,如檢測兩個已知蛋白的相互作用,尋找鑒定與已知蛋白相互作用的蛋白,及檢測多種蛋白之間的相互作用等。美國醫院排名詳詢愛諾美康,與其他檢測蛋白-蛋白相互作用的方法不同,酵母雙雜交并不需要重組蛋白的表達純化等過程。