出國(guó)就醫(yī) 細(xì)胞擴(kuò)增中會(huì)不會(huì)受病毒污染

基于復(fù)制缺陷型HSV-1的載體，一般分為輔助細(xì)胞依賴(lài)型和輔助細(xì)胞非依賴(lài)型兩種；輔助細(xì)胞依賴(lài)型載體也被命名為擴(kuò)增子（amplicons），其擴(kuò)增子是存在缺陷的HSV基因組，由自然重組產(chǎn)生。出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，在高感染復(fù)數(shù)條件下，可通過(guò)連續(xù)傳代進(jìn)行擴(kuò)增。

缺陷型基因組（擴(kuò)增子）至少含有一段終止序列、和一段病毒合成所需的起始序列，其病毒DNA合成的起始需要擴(kuò)增擴(kuò)增子，剪切連環(huán)體DNA和包裝擴(kuò)增子。出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，由于擴(kuò)增子缺少主要編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白的序列，因此必須由某種輔助病毒、提供病毒結(jié)構(gòu)蛋白，以及參與病毒DNA復(fù)制和出胞核所需的蛋白。

通過(guò)刪除關(guān)鍵的HSV-1基因cx4，可構(gòu)建一種輔助病毒。出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，在該系統(tǒng)中，表達(dá)的細(xì)胞系和擴(kuò)增子共轉(zhuǎn)染，隨后使用M刪除的HSV-1進(jìn)行感染；其擴(kuò)增子的長(zhǎng)度通常不足15kb，從理論上來(lái)說(shuō)，擴(kuò)增子可以容納長(zhǎng)達(dá)150kb（HSV-l基因組長(zhǎng)度）的序列。

出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，由于擴(kuò)增子不存在病毒基因表達(dá)停止的基因，因此擴(kuò)增子能在相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)、有效表達(dá)整合的轉(zhuǎn)基因。出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，盡管擴(kuò)增子存在上述優(yōu)點(diǎn)，仍存在某些不足之處：擴(kuò)增子需要輔助病毒編碼缺失的病毒蛋白，因此擴(kuò)增子易受到輔助病毒DNA的污染。

通過(guò)產(chǎn)生不具備包裝功能的輔助細(xì)胞，能部分解決該問(wèn)題。出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，擴(kuò)增子的產(chǎn)量低于野生型病毒數(shù)個(gè)數(shù)量級(jí)，所以復(fù)制子和輔助細(xì)胞的比率較低；之后的選擇性?xún)?yōu)勢(shì)，會(huì)產(chǎn)生更小的復(fù)制子，導(dǎo)致復(fù)制子在連續(xù)傳代后會(huì)不穩(wěn)定。

出國(guó)就醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)愛(ài)諾美康了解到，在某些環(huán)境下，輔助細(xì)胞非依賴(lài)型HSV-1病毒載體，會(huì)刪除比較關(guān)鍵的病毒基因。由于1個(gè)或多個(gè)關(guān)鍵基因被刪除，這些病毒需在具有互補(bǔ)其缺陷的細(xì)胞系中生長(zhǎng)。