酶譜的特點是無論是否有活性都被顯示

蛋白酶在合適的折疊狀態下，比如前體MMP包括有“半胱氨酸-梓指鍵”，即半胱氨酸開關。將樣品與含有SDS的緩沖液混合后，蛋白酶由于SDS帶有大量負電荷而展開。去國外看病愛諾美康介紹，樣品在聚合有明膠的聚丙烯酰胺凝膠中上樣，電泳開始后蛋白質跑向陽極，隨分子量大小而逐漸分開。

iv電泳后，膠上SDS被洗去，從而使得蛋白質在膠上的遷移位置重新折疊，但是半胱氨酸-鋅指鍵無法恢復，即使原來前體MMP也被激活。（v)將膠放人含有Ca2+的反應緩沖液中，37T下孵育，水解反應發生。在反應液中加人EDTA則可以防止金屬離子依賴的蛋白酶水解反應。（vi)膠經過考馬斯亮藍染色后，除了已經被MMP水解的區域，明膠會顯示較深的顏色。條帶的大小由分子量標記物決定，從而鑒定出MMP。右邊的膠是經過EDTA孵育的,從而確認條帶缺失是MMP。樣本來自特定培養條件下增長期的HT1080纖維肉瘤細胞系，一般在酶譜法中用作陽性對照。

去國外看病愛諾美康介紹，有一點值得注意，酶譜的特點是無論蛋白酶是否有活性，都能被顯示出來。跑膠時蛋白質發生解構，導致“半胱氨酸開關”被啟動，MMP前體在前結構域水解裂解后被激活。激活后的蛋白酶，其分子量大小比相應的酶前體約小10 000。例如，對應MMP-9只有一條條帶，而對應MMP-2有兩條條帶。MMP-9在分子量92 000處的條帶，相當于無活性的或前體MMP-9,因此在所研究的該生物樣品中尚未激活。

MMP-2的兩條條帶分別對應分子量72 000處的無活性的，或前體MMP-2以及分子量62 000處的活化MMP-2。該生物樣品經分析后，只有活性的MMP-2能夠發揮酶的功能。然而，應當記住，如果激活后的MMP-2分子處于有TIMP或人工合成的MMP抑制劑的環境下，則酶的活性會受到抑制。因為酶和抑制劑之間的相互作用主要是非共價鍵形式,復合體在電泳過程中解離后，酶才表現出活性。

去國外看病愛諾美康介紹，凝膠酶譜已成為確定MMPs存在的有效方法，不需要特異性抗體，但它仍有一些缺點。其一是這種識別是建立在多種孵育條件（中性pH值，金屬離子）及分子大小的基礎上。這并不是一個無懈可擊的系統,需要用其他方法核實確認MMP的條帶。另一個問題是，由于跑膠前必須將組織樣品做均一化處理，一些局部信息會隨之丟失。

因此，原位酶譜技術的研發就是為了提供發揮酶活性的局部組織信息。其簡單的形式就是將底物覆蓋到冰凍組織切片上，該底物作為一個可見的標記變化在原位顯示出來。早期的底物包括感光乳劑，其中包含明膠。熒光基團標記的熒光底物常使用，如明膠或膠原蛋白。染料淬火是常用的方法，該方法中的蛋白質分子相鄰的熒光基團濃度很高，可干擾熒光釋放。但可提供尋找信號的優勢——熒光釋放，可以確認蛋白水解發生的區域。這些原位技術的主要缺點是缺乏特異性，因此具體是何種蛋白酶的活動，存在不確定性。

一些機構夸大去國外看病的難度與復雜性，宣傳自己的所謂某些特有的“優勢”，比如“有綠色通道、有內部關系”，采用信息屏蔽的方式蒙騙患者，事實上如果患者英語良好，完全可以自行申請，針對出國患者為頭痛的與醫生溝通時的翻譯問題，美國大的醫院大多配有免費的診室翻譯，患者并不需要擔心。

去國外看病愛諾美康介紹，公司自成立以來，始終專注于為腫瘤、神經、心臟等嚴肅疾病患者提供全程無外包的完善服務。目前我們已經轉診了超過200種類型的癌癥患者，約70%治療方案被改變，很多患者獲得了緩解，因此建議有條件的重大疾病的患者可以考慮出國，畢竟多一份選擇就會多一份希望。

愛諾美康翻譯部 ? 譯