海外醫療：PCR是用來擴增特異DNA分子的手段

作為歐洲好的心臟病專科醫院，英國皇家布朗普頓醫院是早使用生物可降解支架的醫院，是生物可降解支架植入術成功率高的醫院。醫院在2005年即在臨床使用生物可降解支架，是英國首個為病人使用生物可降解支架的的醫療中心，至今擁有七年的應用歷史。作為英國好的心肺專科醫院，同時也是英國大的心臟病和肺病?？漆t院，擁有1600多名員工，5個手術室和4個導管實驗室。

海外醫療機構愛諾美康了解到，在核酸的檢測上，幾十年來，Southern和Northern印跡使用放射性同位素或熒光標記的探針進行了DNA和RNA的分析。然而，由于這些技術費時費力，并且需要大量的DNA/RNA，在臨床實驗室中用的越來越少。DNA/RNA的靶標和信號放大，是目前腫瘤分子診斷分析使用的兩種主要技術。靶標放大的例子有PCR、連接酶鏈式反應，基于轉錄的擴增系統和鏈置換擴增，信號放大的例子有支鏈DNA，雜合捕獲和入侵信號放大。原位雜交或顯色原位雜交，是用于分子腫瘤學領域的另一個重要的技術，因為它是在腫瘤形態學的基礎上進行的。

目前，常用的對臨床標本進行分析的分子生物學技術是基于PCR和原位雜交的檢測。此外，DNA/RNA微陣列，經過多年臨床前實驗驗證，已開始被用于臨床實踐中。下一代測序（NGS)，作為一組新興和強大的分子生物學工具，雖尚未被用于臨床，但不久就會因其高精度、大規模處理能力和相對較低的成本而被應用于臨床。

海外醫療機構愛諾美康了解到，聚合酶鏈式反應PCR，是用來擴增一段特異DNA的分子技術手段，以便分析遺傳變異。一個基本的PCR需要以下幾個成分：①一段DNA模板，也即用來擴增的目的序列；②一對引物，目的DNA序列的正義鏈和反義鏈分別互補的一段序列；③DNA聚合酶，適合的擴增溫度在70丈左右；④dNTP，DNA合成過程需要的原料；⑤適合DNA聚合反應的緩沖液。

PCR反應通常在熱循環儀中，以25~504反應體積進行熱循環儀即PCR儀。市售的來自不同制造商的各種PCR儀器可見是臨床實驗室常用的。DNA模板上，通常引物的退火溫度比引物溶解溫度低3~5尤；③延伸步驟通常是在72~75丈，對大多數用于合成新DNA的DNA聚合酶都適合的溫度范圍；④后一個延伸循環步驟，通常是72丈10min，確保單鏈DNA能夠完全延伸；⑤后一個短暫保存循環通常在4~15。

PCR產物也叫做擴增子，通常通過電泳、雜交、酶切以及測序來進一步檢測，DNA電泳檢測根據DNA片段的大小通過一定的黏性介質來分離，例如瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠。瓊脂糖通常用來分離較大片段的DNA分子，而聚丙烯酰胺凝膠用來分離較短DNA片段或需要得到更高分辨率。

熱循環儀器在反應的每個步驟中需要對反應管進行加熱和降溫。典型步驟如下：①DNA變性步驟通常在94~98，20~30s使得DNA變成單鏈；②50?65T退火20?40秒使得引物結合到單鏈。凝膠電泳結束后，DNA片段用一種熒光染料染色，例如溴化乙啶（EB)，然后在紫外燈下成像。

毛細管電泳用310/3100可以達到更高的分辨率，可以檢測到小3個堿基的差異。海外醫療機構愛諾美康了解到，通過毛細管凝膠電泳分析擴增子，通常需要預先對引物用熒光染料標記。擴增子還可以通過與探針雜交檢測，例如斑點雜交。為了檢測點突變，擴增子可以通過內切酶酶切，因為點突變通常會造成 增加或改變一個酶切位點。