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淋巴瘤治療時模板擴增可實現腫瘤測序

發布日期:2018-02-18

海外醫學研究,從FFPE的正常組織和腫瘤樣本上,收集8片或10片約1jxm厚的切片,并將其放在帶正電荷的載玻片上。在顯微鏡下仔細地刮出并收集含有豐富腫瘤的切片。如果腫瘤組織小于總量的20%或30%,淋巴瘤轉診治療后,就需要在激光捕獲顯微切割(LCM)下進行切割。DNA提取可采用酸/氯仿標準操作流程,在37T用蛋白激酶K孵化至少16h后操作。

配對的正常對照和腫瘤DNA,通過公認的引物或標記可用于PCR擴增,例如BAT25、BAT26、D2S124、D5S346和D17S250的不穩定性(MSI)檢測,或對足夠的模板進行PCR擴增,或采用足夠的模板進行PCR擴增后,淋巴瘤轉診治療可實現腫瘤組織的DNA測序。雖然蛋白質不能從FFPE組織中提取,但是RNA可以從FFPE組織中,分離供后續檢測。如RT-PCR、互補DNA(dDNA)微陣列。

既往有一篇淋巴瘤轉診報道,顯示70%的乙醇也可作為固定液,適合組織學檢驗和RNA回收,雖然這項技術尚未得到臨床實驗室的廣泛認可。IHC是有效的輔助檢查方法之一,在外科病理學實驗室廣泛應用。是因為它已常規用于評估腫瘤預后,及預測生物標志物,這項技術深受外科病理學家的喜愛,因為他們可以同時看到組織學形態,和蛋白質的表達模式。

等待手術家屬休息室.jpg

淋巴瘤轉診治療機構愛諾美康介紹,單個抗體混合劑,可用于單個切片或在同一個組織切片上,同時檢測多個抗體。采用比色染色標記的抗體差異性,結合到蛋白質上,根據可視的染色結果判斷蛋白質是否存在。抗原首次檢測是采用冷凍切片,與熒光標記抗體反應。這項技術歷史悠久,自1897年就開始使用DPaulErhlich曾在“鎖鑰原理”中提出,抗原抗體的相互作用,并和ElieMetchnikoff共同獲得諾貝爾生理學或醫學獎。

在分子技術領域,IHC方法因其在評估癌癥生物標志物方面具有簡便、快捷及有效的特點而仍被使用。這里,分析在乳腺癌和大腸癌診斷,及許多腫瘤增殖指數(Ki-67)評估的典型例子。IHC分析的另一個優點在于,其可在FFPE組織切片上進行,而FFPE組織是可以長期保存的。新的擴增方法如以酪胺或聚合物為基礎,標記與傳統的IHC相比,在抗原檢測上更為敏感。而且這些新的IHC方法,在淋巴瘤轉診治療所需要的組織中也更少。

這種技術與DNA微陣列和基因測序等,其他分子檢測技術相比更為便宜。因此其在機構和商業實驗室被廣泛應用,這種技術的缺點,是其結果僅僅是定性的或半定量的。陽性、陰性或有時不確定,由于染色質M及不同結果判讀人員之間的個體差異,或同一人員不同時間解讀的內部差異問題,淋巴瘤轉診治療后,可能發生解讀結果的不一致性。