海外醫療 基因突變的檢測方法及敏感性

經發現，肥大細胞增多癥的特點，是腫瘤性肥大細胞的克隆性增殖，往往與KIT基因的活化點突變相關。KIT基因，位于染色體4ql2，編碼RTK，與干細胞因子結合后在髓系細胞、肥大細胞、神經嵴細胞（黑色素細胞），和配子的發育中起重要作用。海外醫療后，在AML尤其是CBF-ABL、肥大細胞增多癥、胃腸道間質腫瘤和生殖細胞腫瘤，均發現了K1T基因活化突變。

活化突變會導致KIT基因磷酸化，和下游效應包括STAT、RAS-MAPK和P13K-AKT非配體依賴性激活。肥大細胞增多癥患者，大多數KIT基因突變發生在17外顯子的816密碼子（D816V常見），海外醫療中成人系統性肥大細胞增多癥，突變發生率為50%?95%，兒童皮膚肥大細胞增多癥則為30%?50%。

海外醫療所報道的突變率范圍較廣，這可能反映了診斷標準，和基因突變檢測方法敏感性的差異，我們的經驗顯示其發生率約75%。其他罕見的KIT突變包括有D820G、E839K、F522C和V560G等。出現D816V突變者對伊馬替尼耐藥，但對其他抑制劑如達沙替尼或突變檢測。樣本進行細胞分選可以進一步提高檢測的靈敏度，但是在臨床應用方面技術上具有挑戰性。

移植后MRD檢測嵌合狀態，即供體和受體細胞的比例可了解 移植后MRD，檢測方法有以下幾種，包括基于PCR的微衛星多態性分析、RQ-PCR和間期FISH（用于供受者性別不同的患者）。研究表明，混合嵌合增加與高風險復發相關。然而，海外醫療過程中受體細胞增加，并不總是預測疾病即將復發的指標，這可能由于檢測方法的敏感性、移植類型、分析的標本來源、患者的年齡及檢測時間的選擇不同所致。

已經證明，海外醫療采用非常敏感的分子方法，可檢測到短暫的混合嵌合，尤其是在非清髓移植后6?9個月，因此，動態檢測比單次檢測結果更有意義。基于PCR的微衛星分析短串聯重復序列（STR），已成為異基因移植后評估嵌合狀態常用的技術。

利用重復序列兩側的引物進行PCR擴增，之后通過基于熒光的毛細管，電泳分析PCR產物的大小，進而計算重復的數量，該技術提供的信息量很大。因為采用多重PCR評估多個STR位點，人們幾乎總能找到每對供受者的至少一個STR位點。海外醫療服務機構愛諾美康介紹到，通過比較電泳 圖譜上峰的面積，STR-PCR可用來定量供者，與受者等位基因的比例，其靈敏度為1%~5%。