淋巴瘤轉診治療后如何采用突變檢測方法

臨床發現，焦磷酸測序在整個基因組擴增后，它能夠有效地利用石蠟包埋的腫瘤組織和DNA樣本，具有較高的靈敏度，甚至在炎性細胞豐富的腫瘤中，如在結直腸癌MSI中可以看到，或具有細胞核豐富機制的促結締組織增生性胰腺癌，或以前治療過、僅含有少量剩余腫瘤細胞。淋巴瘤轉診治療后，采用一個簡單、強大和高通M的突變檢測方法，可應用于大型的流行病學研究和臨床試驗?？梢詼蚀_地定量每個等位基因，從緊臨焦磷酸測序引物的第一個核背酸，開始讀取核苛酸序列，因此可設計相對小的PCR產物。

設計小的PCR擴增產物，對DNA降解特別有用，特別是來自石蠟組織中的DNA，其中的DNA通常是分裂成較短的片段。同時，雙脫氧測序需要PCR擴增產物純化。在得到PCR產物后，就沒有必要再對焦磷酸測序，進行單獨的凈化步驟了。后，淋巴瘤轉診治療在試劑和勞動時間方面，焦磷酸測序比雙脫氧測序，更符合成本效益比。

Ras基因家族（HRAS、KRAS、NRAS）是參與信號轉導途徑，活化的三磷酸鳥苷（GTP）結合蛋白。KRAS基因是一個常見的人類癌基，17%~25%的淋巴瘤轉診含有激活的KRAS突變。這些中的大多數是12、13密碼子和2號外顯子。這些突變使GTPase的活性受損，從而導致GTP抑制處于持續活化狀態。在30%?40%結直腸癌中，發現有激活的KRAS基W突變，從而引起通過絲裂原活化蛋白激酶途徑細胞增殖，在非常早期的腺瘤中卻很少發現這些突變，因為我們認為這種突變是在腫瘤發生發展的中間階段獲得的。

淋巴瘤轉診治療機構愛諾美康介紹，EGFR通過相同下游途徑對下游的有絲分裂產生影響。分子生物學研究表明，活化的EGFR、KRAS、BRAF和PI3CA突變可以激活KRAS突變，而這種突變可以繞過EGFR控制。很顯然，KRAS突變的腫瘤患者不能從抗EGJFR治療中獲益。在美國臨床腫瘤學會指南中，不推薦抗EGFR治療用于KRAS突變的轉移性結直腸癌。

此外，并非所有KRAS野生型患者會對EGFR抑制劑有效。淋巴瘤轉診治療后，針對靶向治療，需要更多的生物標志物以更好地辨別，對該治療的有效者和無效者。由于大多數KRAS突變位于基因的離散區域，所以焦憐酸測序法是常用的臨床檢測方法。市售的KRAS基因的PCR試劑盒（DXS/Qiagen）可以檢測KRAS 12和13密碼子的7個主要突變。

一些修飾的檢測，發現淋巴瘤轉診后，KRAS突變的擴增方法，例如，據報道在擴增阻滯突變系統Scorpion法，已增加了靈敏度，改善了KRAS基因測試結果的質量，為提高抗EGFR抗體的效果提供了動力。