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赴美就醫(yī) 不同的聚合酶可被其它化合物影響

發(fā)布日期:2018-02-26

血液樣本的采集,對人體是非侵入性的,常規(guī)用于血液系統(tǒng)腫瘤的診斷。影響從血中提取核酸的數(shù)量和質(zhì)量的兩個主要因素,一是運輸及儲存條件,二是抑制物的存在及外源性穩(wěn)定劑的使用。而對于運輸及儲存條件,理想的情況是即刻送檢并及時提取。而儲存溫度則應足夠低,以避免赴美就醫(yī)過程中核酸酶引起核酸降解。

有研究表明,樣本在室溫條件下存放24h,并不影響核酸質(zhì)量,若要更長時間的儲存則應當先把核酸從血液中提取出來,再保存至-20~-80t環(huán)境中。另外,分裝樣本也十分有必要,可以避免反復凍融引起的核酸降解。由于儲存和運輸條件決定核酸的質(zhì)量,赴美就醫(yī)實驗室應當記錄每份樣本的保存溫度和時長。

某些血液樣本可能含有抑制物,可能會影響赴美就醫(yī)過程的后續(xù)分子檢測,例如血樣中有兩個主要的抑制物,分別為存在于紅細胞及白細胞中,血紅蛋白及乳鐵 蛋白如果一份樣本呈現(xiàn)微紅色,而且260/280值 低于1.6的情況,則提示很可能存在這類抑制物。為降低這些抑制物的影響,可選用一些PCR增強劑,如白蛋白、gP32、甘油、二甲亞砜(DMSO)、三甲銨乙內(nèi)酯、聚乙二醇(PEG)、右旋糖苷等。

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赴美就醫(yī)服務機構(gòu)愛諾美康介紹到,除了血紅蛋白及乳鐵蛋白,血液樣本中還可能包含一些小分子(如鈣和鐵),及抗凝劑(如EDTA和肝素)等其他PCR抑制物。而其他類型的樣本,也可能包含與上述血紅蛋白及乳鐵蛋白等,有類似作用的分子。如皮膚樣本中的黑色素、骨和軟骨組織中的鈣,及結(jié)締組織和骨組織中的膠原等。

當檢測樣本中含有上述抑制物分子時,建議稀釋樣本,以降低PCR抑制物的濃度,在赴美就醫(yī)中提高PCR效率,該方法在樣本呈現(xiàn)黏稠狀時尤其有效。PCR抑制劑的作用機制,可能是結(jié)合到聚合酶、結(jié)合到模板或充當螯合劑。

除了使用PCR增強劑外,也可考慮其他的方法,如優(yōu)化引物設計,使其具有較高的解鏈溫度,以增加模板結(jié)合效率或縮短擴增產(chǎn)物,進而降低抑制物模板相互作用的可能性。赴美就醫(yī)服務機構(gòu)愛諾美康介紹到,此外,由于不同的樣本類型含有不同的抑制物,不同的DNA聚合酶可以被許多化合物影響。因此,需要根據(jù)檢測中所用的樣本類型,來仔細考慮選擇合適的聚合酶。