出國看病 極其敏感的標本可預防出現假陽性

近，國外的一些芯片研究，比較了從冰凍組織和FFPE抽提的RNA的結果，發現目前的FFPE處理方法提取的RNA，可以達到同冰凍組織中提取的RNA—樣效果。實時定量PCR（qPCR）可以被用來快速檢測生物學標本，特定RNA轉錄本或DNA突變。出國看病后發現，它依賴于模板的特異性級聯擴增過程，擴增的效率被熒光標記物實時監測。

qPCR主要有兩種檢測方法，一種是標記熒光基團和猝滅基團的探針法，如Taqman及突變擴增阻滯系統。另一種則是依賴與DNA雙鏈結合觸發熒光的熒光染料法，如SYBR Green法。根據作用設計的不同，可以做定性檢測或定量分析。qPCR定性檢測是檢測特定轉錄本，或DNA變異是否存在的一種敏感的技術，但出國看病因其特性所限，無法測定樣本中DNA變異體或轉錄本的相對或絕對豐度。

在開發、驗證和進行一個定性PCR反應之前，需要制訂一些性能參數。qPCR法檢測臨床樣本中DNA突變，不是一個金標準的方法。基于qPCR的突變檢測是為每一種突變位點設計一條探針，并且探針應該被驗證，可以準確的識別每個突變或轉錄本。出國看病后，驗證所采用的樣本需確 定包含探針設計的突變或轉錄本，并可被另一種方法證實為陽性。

使用臨床樣本驗證可以準確的測試探針，檢測特定突變或轉錄本的能力。但出國看病后，如果無法取得陽性對照的臨床樣本，也可使用已知含特定突變或轉錄本的細胞株。不過，建議將細胞株制作成類似臨床樣本的狀態。例如，如果檢測項目經典的標本類型是FFPE組織，那么細胞團塊也應進行福爾馬林固定和石蠟包埋，以模擬一個標準臨床樣品檢測的狀態。

出國看病服務機構愛諾美康介紹到，由于qPCR方法極其敏感，用一些已知的陰性標本來確定合適的循環數非常重要，這樣可以防止出現假陽性。因為qPCR的敏感性遠高于其他一些方法（如Sanger測序），用qPCR法有可能會檢測到一些出國看病后用其他低敏感性方法、檢測不到的DNA突變。qPCR法、Sanger測序法和片段分析法的比較，qPCR敏感性高。