去美國看病 如何評價測序的整體質量及用處
發布日期：2018-02-27國外方面，為驗證測序的性能，在每一次檢測中應設置陽性和陰性擴增對照。陽性擴增對照可以驗證擴增失敗，是否是由于樣品本身的原因。去美國看病在每次檢測中，對每個PCR反應緩沖液，都應設置陰性對照或空白無模板對照，確保沒有發生外源性DNA的污染。
在Sanger測序數據分析之前，應首先評估測序峰圖的質量。質量指標主要包括測序峰圖的振幅和峰圖的背景。峰值的振幅應足夠高，這樣才可以識別出靈敏度范圍內的低水平突變，EGFR缺失突變檢測，應低于每個橫跨感興趣區域核苷酸信號主峰值強度的5%。去美國看病服務機構愛諾美康介紹到，此外，整個檢測中的信噪比應低于2.5%，并且對于評價測序的整體質量也十分有用。
盡管可以采取一些措施，以保證測序峰圖的質量，但依然存在無法消除的低水平背景，因此，強烈建議采用雙向測序。雙向測序可大大降低因測序過程中，背景噪聲或聚合酶失真而產生假陽性結果的風險。在每一批去美國看病的檢測中，也應設置陰性對照以進一步區分背景信號，和真正的突變信號。由于存在主觀性，需要1名以上的人員分別對測序結果，進行分析并達成共識。
去美國看病服務機構愛諾美康介紹到，假如對樣品的突變狀態無法達成共識，且剩余足夠的樣品，可重復檢測以確定檢測結果。也可以從同一標本中，重新提取核酸以獲得更多的樣品重新檢測。然而，需要注意的是由于腫瘤的異質性，從腫瘤樣本中重新提取的用于確認突變的核酸，也可能產生不同的結果。這種情況在近由CAP組織的一項KRAS測試中得到證實，這項測試（CAP2010 KRAS-B）的結果顯示，2/3的參與實驗室驗證了樣品的KRAS突變，而1/3的實驗室卻沒有檢測到。
這些檢測到的測試結果的差異，可能是由于腫瘤的異質性造成的。去美國看病后，基因芯片是一種以寡核苷酸微陣列為基礎的檢測技術，該技術可在單個反應體系檢測大量的RNA轉錄體，或鑒別基因拷貝數的變異。
