出國就醫 臨床標本確認用于完成檢測驗證

經研究發現，在檢測腫瘤細胞突變時，合適的陰性對照是從被確定未患腫瘤的個體，取到的正常組織腫瘤的個體。出國就醫服務機構愛諾美康介紹到，這些組織經經驗豐富的病理醫生，確認沒有腫瘤細胞，并且已經用第二種分子學檢測方法證實是陰性。

某些情況下，為謹慎起見可設置多個陰性對照，以確保檢測是正確的。在使用其他腫瘤或癌旁正常組織，做對照時也存在一些陷阱，包括存在用欠敏感方法未檢測到的突變；少量突變陽性的腫瘤細胞浸潤到周圍正常組織中；腫瘤突變的異質性；染色體重排等其他遺傳變異。出國就醫后所有這些因素，將導致確定陰性的Ct值（即陰性閾值）為升高，增加報告假陰性的風險。

已知陰性樣本的檢測，對于證實分析方法的特異性也很重要。qPCR過程中少量非特異性擴增，也會導致報告假陽性結果的風險增加。出國就醫的檢測整體的敏感性，應該采用真實世界的臨床標本（如FFPE或冰凍組織），來進行經驗性的確認，以此來完成檢測方法的驗證。檢測DNA變體或特異轉錄本的探針，是可以商業化購買的。并且可以提供一個敏感性的水平，但其可能只是理論上的，可能并沒有經過常規臨床診斷實驗室中，所檢測的相似材料所確認。

因此，非常有必要用標準接收的樣 本進行敏感性的確認。qPCR檢測時設置幾種對照至關重要，應用內部擴增對照可以確保樣品，有足夠的量用以檢測。突變檢測時，同時檢測該基因的野生型等位基因（WT），和一個在所有組織中都表達的管家基因。出國就醫后，陽性對照設置的目的是為了確保陰性結果，不是由于樣本質量差或是由于定量造成樣本量減少，或是人為誤差等原因。因為qPCK敏感性高，每次檢測都用WT對照，是為了證實沒有交叉污染造成的假陽性。

而不含核酸的空白對照的設置則有助于排除污染，避免假陽性。定量檢測MqPCR是檢測臨床樣品中，特定HNA轉錄本的表達水平，和突變負荷的“金標準”方法。由于定量qPCR的可重復性和敏感性，使其可用來檢測低突變負荷和微小殘留灶。為確保出國就醫后該檢測方法的準確性和可重復性，需要制定相應的檢測及質量標準。

在設計定量qPCR檢測時，需要確定探針的效能。可以通過梯度稀釋拷貝數已知的樣品，并確定每個稀釋液的Ct來實現，這可以利用細胞系或是人工合成的陽性對照。出國就醫應用這些對照來確定探針檢測的上、下限也很重要。