出國治療 引物的延伸需要調整溫度和時間

通常，PCR所需要的循環數和起始目的DNA拷貝數成反比。例如，起始濃度為105的模板分子，需要25個循環才能在凝膠電泳中，經溴化乙錠作用顯出條帶。拷貝數低的目的DMA，需要更多的循環數。出國治療后如果起始時DNA拷貝數為2，鑒于目的DNA在每個PCR循環后將翻倍，那么理論上在n個循環后PCR擴增產物將會擴大很多。

然而經過25個循環，PCR擴增產物將進入平臺期，這是因為反應成分（大部分為dNTP）的消耗導致反應速度減慢。此外，熱變性導致的DNA聚合酶效率穩步下降也是一個原因。出國治療后引物延伸步驟，需要調整溫度和延伸時間。延伸溫度由所使用的DNA聚合酶佳功能溫度決定，而延伸時間由目的DNA序列的長度決定。

例如，使用Taq DNA聚合酶，經典的延伸溫度是72°C，延伸時間為1分鐘時，可得到長達2kb的產物。PCR試劑因為使用了目標特異性引物，所以，與其他核酸 分析方法相比，PCR的主要優點之一為具有高度特異性。出國治療服務機構愛諾美康介紹到，兩條單鏈引物分別結合到所需要的雙鏈目的DNA序列，引物（通常被定義為上游引物和下游引物）與變性的單鏈DNA互補結合。

設計引物時，要掌握目的DNA序列相關的知識。出國治療設計理想的引物，需注意以下幾個原則：第一，引物應具有特異性，其只能與目的DNA序列結合，以盡量減少非特異性擴增的機會。第二，引物自身或引物之間不應存在互補序列，以防止引物二聚體形成。第三，應該加入比目的DNA摩爾濃度更多的引物，因為引物在每個循環中都會被消耗。

后，優化退火溫度對于特異性來說是很有必要的，因為溫度太低容易產生非特異性結合，而溫度太高會導致退火失敗。退火溫度是由引物的解鏈溫度決定的，出國治療后可讓醫療中心設計引物，并計算每條引物的退火溫度。

出國治療服務機構愛諾美康介紹到，PCR的穩健性，來自于它具有擴增不同來源DNA的能力。如來源于組織、外周血或其他材料。組織可以是新鮮的、冷凍的或是經甲醛固定的。此外，核酸可以是RNA、基因組DNA，或者是線粒體DNA。事實上，PCR是如此強大，甚至能將來源于甲醛固定的石蠟包埋組織中的片段DNA，在納克水平上進行有效地擴增。