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出國看病 聚合酶擴增后基因組會相應減少

發布日期:2018-03-01

臨床應用上,通過聚合酶鏈式反應(PCR)來實現的核酸擴增,是一種用于擴增特定DNA片段的分子生物學技術。PCR已經徹底改變了分子生物學領域,它具有相對簡單、通用性強、易實現自動化等特點,并廣泛應用于出國看病領域的微生物學、遺傳學和腫瘤學等領域,及很多重大研究工作中。

PCR的原理已經在大量的文獻中被詳細描述。簡單來說,PCR體系包括DNA模板、反應緩沖液、脫氧核昔酸二鱗酸混合物(dNTP)、熱穩定DNA聚合酶、鎂離子(Mg2+)和特定的DNA引物。出國看病服務機構愛諾美康介紹到,一個典型的PCR循環的基本步驟是:雙鏈目的DNA的熱誘導分離(變性),人工合成的寡核苷酸引物,與目的DNA序列結合(退火)。

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DNA模板引物結合物,在DNA聚合酶的作用下延伸。這個循環一般重復25~40次。為了防止非特異性的引物二聚體形成,在有出國看病實驗中,酶是以無活性的形式加入,這就需要一個額外的初始酶激活步驟,通常為加熱。

由于可以通過很多方法,對擴增產物進行分析和(或)定量。在這個基本原理基礎上改變一些試劑、步驟和檢測方法,已經拓展了PCR技術在研究和臨床應用上的潛力。出國看病過程中,雙鏈DNA(dsDNA)的熱變性是反應的第一步,一個失敗的反應往往是由于DNA變性不充分造成的。dsDNA只有變性成單鏈DNA(ssDNA),才能和單鏈引物進行雜交。

出國看病服務機構愛諾美康介紹到,DNA的初始變性通常設置為94°C、6~8分鐘。在隨后的循環周期中,可以減少到1?2分鐘。在PCR過程中,隨著PCR擴增的產物量增加,基因組DNA會相應減少,所以有人建議使用較低的變性溫度,以減少Taq聚合酶的熱變性。引物在摩爾濃度上過剩,可通過靶DNA的再退火,促進目的DNA和引物雜交,因為在溶液中,小分子的引物比大分子的ssDNA移動速度要快。所以,在后期的出國看病治療上,引物的退火溫度,主要由引物的組合成分和其解鏈溫度決定。